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黃芪甲苷的測定

發布日期 2019-12-02
黃芪甲苷的測定(HPLC-ELSD法)
1.範圍
本標準適用於測定黃芪(Astragalus Root, RADIX ASTRAGALI,A.membranaceus(Fisch.)Bge豆科)中黃芪甲苷(astragaloside)的含量。

2.原理
黃芪甲苷在紫外區吸收差(它的 吸收波長為200.8nm),改用ELSD后,所用的流動相全部蒸發,不干擾測定,因此靈敏度高,而穩定性及重現性均符合測定要求。
3.試劑
3.1 重蒸水
3.2 乙腈(色譜純)
3.3 甲醇(分析純)
3.4 黃芪甲苷標準品(astragaloside Ⅳ,C41H68O14)

4. 儀器
4.1 高效液相色譜儀(配色譜工作站)
4.2 分析天平(1/10000)
4.3 超聲波清洗儀
4.4 0.45 m 微孔過濾器
4.5 ELSD檢測儀(Alltech 2000)
4.6容量瓶
4.7帶塞小玻璃瓶
4.8 色譜柱 Shimpack VP-ODS C18 5 m 4.6150mm
5.分析步驟
5.1黃芪甲甙標準品儲備溶液:稱取10mg黃芪甲甙標準品置於50ml的容量瓶中,用甲醇溶解,超聲冷卻定容,0.45 m微孔濾膜過濾,于冰箱中保存。
5.2黃芪甲甙標準品供試液:取黃芪甲甙標準儲備溶液0.0、1.0、2.0、3.0、5.0、7.0、9.0、10.0ml置於10ml的容量瓶中,用水稀釋到刻度,搖勻,即為供試液。
5.3 待測樣品供試液
5.3.1精確稱取50mg提取物于50ml容量瓶中,用甲醇超聲溶解,冷卻定容,0.45 m微孔濾膜過濾為供試液。
5.3.2精密稱取本品粗粉約1.5g,置索氏提取器中,加甲醇40ml,冷浸過夜,再加甲醇適量,回流4h,提取液回收甲醇並濃縮至干,殘渣加水10ml,微熱使溶解,用水飽和的正丁醇振搖提取3次,每次20ml,合併正丁醇提取液,用氨試液提取2次,每次20ml,棄去氨液,正丁醇液蒸干,殘渣加水3-5ml使溶解,放冷,通過D101型大孔吸附樹脂柱(內徑1.5cm,長12cm),以水50ml洗脫,棄去水液,再用40%乙醇30ml洗脫,棄去洗脫液,繼用70%乙醇50ml洗脫,收集洗脫液,蒸干,用甲醇溶解並定容至2ml,搖勻,即得供試品溶液。
5.3.3供試樣品溶液的制備:精密稱取黃芪藥材粉末2g,加2%的氫氧化鈉甲醇溶液30ml,回流提取3次,每次1h。合併提取液,放置在水浴上蒸干,殘渣加水30毫升溶解,轉移至分液漏斗中,加氯仿——正丁醇(2:1)振搖提取4次。每次20ml;合併提取液,蒸干,殘渣用甲醇轉移至5毫升容量瓶中。
5.4 色譜條件
5.4.1 流動相 A:水 B:乙腈
A : B = 66 : 34 ( V / V ,等梯度)
流速 1.0ml/min
漂移管溫度: 100℃
氣體流速: 2.7L/min
進樣量: 10l
柱溫: 30℃(見圖)
5.4.2流動相 甲醇—水(75:25)
流速 1.0ml/min
漂移管溫度: 75℃
氣體流速: 2.0L/min
進樣量: 10l
柱溫: 30℃ (見圖1)
5.5 線性範圍
分別精確吸取上述對照品溶液5.0、10.0、15.0、20.0、25.0ul注入液相色譜儀中,以峰面積的自然對數為橫坐標,以濃度的自然對數為縱坐標,作圖,線性回歸方程為:Y=0.731X—4.13;線性範圍為1.0——5.0mg,相關係數r=0.9996。
5.6 樣品的測定:
精確吸取待測樣品供試液10l,注入液相色譜儀,得出峰面積。將峰面積及濃度均取自然對數后,用外標法計算,求出供試品濃度的自然對數,再轉換成供試品的含量。
5.7 計算:
將樣品的峰面積的自然對數帶入線性回歸方程Y=aX+b
其中: Y 為峰面積的自然對數
X 為進樣量(g)的自然對數
a 為線性方程的斜率
b 為線性方程的截距




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